研究背景

哮喘是一種以氣道慢性炎癥、高反應(yīng)性和黏液過度分泌為特征的異質(zhì)性疾病，全球患者已逾3億。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為Th2細(xì)胞及其2型細(xì)胞因子是主要驅(qū)動(dòng)因素，但越來越多的臨床與動(dòng)物證據(jù)提示，肺組織內(nèi)固有免疫群體—2型固有淋巴樣細(xì)胞（ILC2）可在無適應(yīng)性免疫的情況下快速分泌IL-5、IL-13，放大嗜酸性粒細(xì)胞浸潤與杯狀細(xì)胞化生，成為哮喘發(fā)作的“點(diǎn)火器”。與此同時(shí)，肺內(nèi)占比最高的免疫細(xì)胞M2型巨噬細(xì)胞在過敏原刺激下顯著增多，其分泌的胞外囊泡（M2EV）已被證實(shí)可攜帶活性分子進(jìn)行跨細(xì)胞調(diào)控，但M2EV是否、以及如何調(diào)控ILC2功能仍屬空白。厘清這一固有免疫內(nèi)部對(duì)話機(jī)制，有望發(fā)現(xiàn)不依賴T/B細(xì)胞的新治療靶點(diǎn)。

 研究結(jié)果

1. M2EV的分離與鑒定

差速超速離心結(jié)合TEM、NTA和WB證實(shí)，OVA哮喘小鼠肺組織富含直徑≈115nm、經(jīng)典EV標(biāo)志陽性而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白陰性的囊泡；流式及qPCR進(jìn)一步顯示這些EV高表達(dá)M2巨噬特征分子CD206與Arg-1，說明其主要來源于M2巨噬細(xì)胞。

2. GW4869抑制實(shí)驗(yàn)

nSMase2抑制劑GW4869顯著減少肺EV生成，同步降低ILC2數(shù)量、Ki67增殖指數(shù)及胞內(nèi)IL-5/IL-13水平，BALF中2型細(xì)胞因子和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤亦明顯緩解，且保護(hù)效應(yīng)在Rag1-/-小鼠一致，表明M2EV對(duì)ILC2的激活獨(dú)立于T/B細(xì)胞。

3. 巨噬細(xì)胞清除與M2EV回輸

氯膦酸脂質(zhì)（CL）體清除肺巨噬后，ILC2比例及功能下降；隨后氣道回輸純化M2EV可完全恢復(fù)ILC2數(shù)量、IL-5/IL-13分泌并重新加重肺組織炎癥和黏液生成，證明M2EV是維持ILC2功能的關(guān)鍵介質(zhì)。

4. ILC2攝取M2EV的機(jī)制

PKH26標(biāo)記M2EV經(jīng)氣道給藥后，共聚焦和流式顯示肺ILC2內(nèi)吞熒光囊泡；體外抑制實(shí)驗(yàn)揭示該過程依賴dynamin介導(dǎo)的網(wǎng)格蛋白內(nèi)吞、小窩/脂筏內(nèi)吞及大分子胞飲多條途徑。

5. M2EV對(duì)巨噬細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞的間接作用

M2EV被21.5%肺巨噬細(xì)胞和9%CD4+T細(xì)胞攝取；回輸M2EV顯著增加肺內(nèi)M2巨噬和Th2比例，伴隨ILC2功能增強(qiáng)，體外共培養(yǎng)亦證實(shí)M2EV促進(jìn)巨噬向M2極化并增強(qiáng)Th2表型，提示其通過第三方細(xì)胞間接放大ILC2反應(yīng)。

6. lncRNA4930474H06Rik的篩選與驗(yàn)證

RNA-seq鑒定762個(gè)在M0-EV與M2-EV差異表達(dá)的lncRNA；綜合表達(dá)豐度、物種保守性及鄰近哮喘相關(guān)基因DACT1，鎖定核內(nèi)高表達(dá)的antisense lncRNA 4930474H06Rik，其在M2EV及哮喘肺組織中均顯著富集。

7. 體外抑制4930474H06Rik的功能分析

用smart silencer敲低巨噬細(xì)胞4930474H06Rik后，所獲M2EV誘導(dǎo)ILC2增殖、IL-5/IL-13分泌及GATA3蛋白表達(dá)的能力明顯下降；同時(shí)ILC2糖酵解酶表達(dá)和ECAR升高，表明該lncRNA通過抑制糖酵解維持ILC2的2型功能。

8. 體內(nèi)干預(yù)4930474H06Rik的抗炎效應(yīng)

哮喘小鼠接受“4930474H06Rik低表達(dá)”M2EV后，支氣管周圍炎癥、杯狀細(xì)胞增生、BALF IL-13水平及肺嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著降低，肺M2巨噬減少而M1增多，證實(shí)靶向該lncRNA可阻斷M2EV-ILC2軸并緩解過敏性氣道炎癥。

 研究結(jié)論

本研究首次闡明肺M2巨噬細(xì)胞通過胞外囊泡直接并間接激活I(lǐng)LC2驅(qū)動(dòng)過敏性氣道炎癥，且證實(shí)囊泡內(nèi)lncRNA4930474H06Rik是這一跨細(xì)胞對(duì)話的關(guān)鍵活性分子。抑制4930474H06Rik可削弱ILC2功能、降低2型細(xì)胞因子分泌并顯著緩解哮喘樣病變，為以“固有免疫-囊泡-lncRNA”為靶點(diǎn)的哮喘精準(zhǔn)干預(yù)提供了新思路與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

LvK,ZhangY,YinG,LiX,ZhongM,ZhuX,PeiW.ExtracellularvesiclesderivedfromlungM2macrophagesenhancegroup2innatelymphoidcellsfunctioninallergicairwayinflammation.ExpMolMed.2025Jun;57(6):1202-1215.doi:10.1038/s12276-025-01465-6.Epub2025Jun2.PMID:40451928;PMCID:PMC12229531.